BD Stain Buffer染色缓冲液FBS  554656，BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS)

染色缓冲液（Stain Buffer, FBS）使用说明

适用范围
本染色缓冲液（含胎牛血清，FBS）适用于以下样本的单细胞悬液免疫荧光染色：

• 淋巴组织

• 骨髓

• 外周血

• 培养细胞

主要功能

1. 荧光试剂的稀释与孵育

2. 流式检测细胞的悬浮、洗涤及短期保存

配方特性

• 以中性pH（7.4）缓冲盐溶液（DPBS）为基础

• 添加热灭活（56°C，30分钟）胎牛血清（FBS）蛋白

• 含代谢抑制剂NaN₃

核心优势
✔ 维持细胞活力
✔ 优化pH敏感荧光染料信号（如FITC）
✔ 抑制抗原修饰：通过NaN₃阻断抗体交联导致的细胞表面抗原脱落或内化
✔ 信号稳定性：配合低温环境可防止免疫荧光染色信号衰减

推荐实验流程：流式细胞术（直接免疫荧光染色法）

已验证方案

1. 样本制备

• 从以下样本制备单细胞悬液（标准操作）：
  ✓ 淋巴组织
  ✓ 骨髓
  ✓ 外周血
  ✓ 培养细胞

2. 细胞洗涤

• 用预冷 Stain Buffer (FBS) 洗涤细胞两次

• 离心沉淀细胞（300 × g，4°C）

• 重悬细胞至终浓度 2 × 10⁷ 个细胞/ml（使用预冷缓冲液）

3. 分装细胞

• 每份分装 50 µl 细胞悬液（含 1 × 10⁶ 个细胞）至：
  ✓ 流式管
  ✓ 微孔板圆底孔

4. 抗体孵育

• 用 Stain Buffer (FBS) 稀释荧光抗体至最佳工作浓度

• 加入 10 µl 稀释抗体 至细胞悬液

• 冰上避光孵育 20 分钟（低亲和力抗体可延长至 ≥45 分钟）

5. 洗涤未结合抗体

• 按容器选择洗涤体积：
  ✓ 微孔板：200 µl/孔
  ✓ 流式管：1 ml/管

• 离心（300 × g，5 分钟）

• 小心吸弃上清（微孔板/流式管）或倒置吸干（流式管）

6. 重悬细胞

• 按容器选择重悬体积：
  ✓ 微孔板：200 µl
  ✓ 流式管：0.5 ml

• 若使用微孔板，转移细胞至流式管并调整终体积至 ~0.5 ml

7. 流式检测

• 建议染色后 4 小时内上机检测

• 若需延迟：
  ✓ 用缓冲多聚甲醛固定（如 BD Cytofix™, Cat. No. 554655）
  ✓ 4°C 避光保存
  ✓ 固定后建议 1 周内完成检测

注意事项

1. 间接免疫荧光染色

• 若使用 未标记/生物su化一抗，需重复步骤 4-5

• 生物su化抗体检测时，建议换用 无生物su的 Stain Buffer (BSA)（Cat. No. 554657）

2. 胞内抗原染色兼容性

• 本缓冲液适用于 表面抗原染色，后续可固定并进行胞内因子（如细胞因子）染色

• 染色后的细胞可暂存于 Stain Buffer (FBS)（4°C 避光），维持信号稳定性

BD Stain Buffer染色缓冲液FBS  554656，BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS)